Polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) hayot fanlari laboratoriyalarida eng mashhur usullardan biridir.
PCR plitalari to'plangan namunalar yoki natijalarni mukammal qayta ishlash va tahlil qilish uchun birinchi darajali plastmassadan tayyorlangan.
Ular nozik, bir xil devorlarga ega bo'lib, ular aniq issiqlik uzatishni ta'minlaydi.
Haqiqiy vaqtda qo'llashga tayyorgarlik ko'rishda DNK yoki RNKning kichik fraktsiyalari ajratiladi va PCR plitalarida saqlanadi.
PCR plitalari issiqlik bilan yopishda juda samarali va issiqlik oqimini cheklaydi.
Biroq, PCR plitalari samarali va ishonchli bo'lgani uchun, ular namunalarni qayta ishlashda xato va noaniqliklarga moyil.
Shunday qilib, agar siz sifatli PCR plitalarini olishni istasangiz. Ishonchli PCR plastinka ishlab chiqaruvchisi bilan bog'lanish yaxshidir. Shu bilan siz eng yaxshi narxni olishingizga ishonch hosil qilishingiz mumkin.
Quyida reaktivlar yoki namunalarning ifloslanishini oldini olish va noto'g'ri natijalarni oldini olish uchun ba'zi ehtiyot choralari keltirilgan.
Atrof-muhitni dezinfektsiyalash
Nopokliklar mavjudligi sababli noto'g'ri ijobiy yoki salbiy natijalar natijalarga shubha tug'dirishi mumkin.
Nopokliklar va ifloslantiruvchi moddalar bir-biriga bog'liq bo'lmagan DNK yoki kimyoviy qo'shimchalar kabi turli shakllarda bo'lib, natijada reaktsiyaning samaradorligi va samaradorligini pasaytiradi.
PCR plitalarining ifloslanish darajasini sezilarli darajada kamaytirishning ko'plab usullari mavjud.
Sterilizatsiyalangan filtr uchlaridan foydalanish aralashmalarning pipetka orqali namunaga kirishini oldini olishning yana bir foydali usuli hisoblanadi.
To'liq toza uskunalar to'plami, jumladan pipetkalar va tokchalar, PCRdan foydalanish uchun maxsus taqdim etiladi. Bu laboratoriya atrofida iflosliklar yoki ifloslantiruvchi moddalarning ahamiyatsiz tarzda o'tkazilishini kafolatlaydi.
Kontaminatsiyani tozalash uchun pipetkalar, stendlar va skameykalarda oqartirgich, etanoldan foydalaning.
Zarrachalar ifloslanishini yanada kamaytirish uchun barcha PCR reaktsiyalari uchun ajratilgan joy ajrating.
Har qadamda toza qo'lqoplardan foydalaning va ularni tez-tez o'zgartiring.
PCR plitasi
Shablonning kontsentratsiyasi va tozaligini tekshiring.
PCR yordamida namunalarni tahlil qilish uchun ishlatiladigan o'rindiqlar va jihozlarning tozaligi saqlanishi kerak. Tahlil qilish va qayta ishlashdan oldin namunalarning tozaligini tekshirish juda muhimdir.
Odatda, analizator DNK namunasining kontsentratsiyasi va tozalik darajasini hisobga oladi.
260nm / 280nm absorbans nisbati 1,8 dan kam bo'lmasligi kerak. Keyin aralashmalar 230 dan 320 nm gacha bo'lgan to'lqin uzunliklari yordamida aniqlandi.
Bir misolda xaotrop tuzlar va boshqa organik birikmalar 230 nm yutilishda aniqlangan. Bir vaqtning o'zida DNK namunalaridagi loyqalikni 320 nm da absorbansda aniqlang va tekshiring.
PCR plitalari va mahsulotlarini ortiqcha yuklashdan saqlaning
Bir vaqtning o'zida bir nechta mahsulotni ishlatish maqsadga muvofiq bo'lsa-da, bu PCR plitalarining o'zaro kontaminatsiyasiga olib kelishi mumkin.
PCR plitalarini turli mahsulotlar bilan ortiqcha yuklash isrofgarchilikdir va namunalarni aniqlashni qiyinlashtiradi.
PCR reagentlarining alikvotlarini yozib oling
Doimiy muzlash/eritish davrlari va alikotlardan tez-tez foydalanish qayta kristallanish orqali PCR reagentlari, fermentlar va DNTPlarga zarar etkazishi mumkin.
Namunalarni tahlil qilish uchun tayyorlashda har doim ishlatiladigan alikvotlar tezligini kuzatishga harakat qiling.
Afzal LIMS muzlatish yoki eritilishi kerak bo'lgan reaktivlar va namunalar zaxiralari va miqdorini nazorat qilish uchun ko'proq mos keladi.
Optimal tavlanish haroratini tanlang.
Noto'g'ri tavlanish haroratini tanlash va ishlatish PCR natijalarida xatolar bo'lishining yana bir usuli hisoblanadi.
Ba'zida javob rejalashtirilganidek bo'lmaydi. Muvaffaqiyatli reaktsiyani ta'minlash uchun tavlanish haroratini pasaytirish kerak.
Biroq, haroratni pasaytirish noto'g'ri musbat va primer-dimerlar ehtimolini oshiradi.
PCR plitalarini ishlatganda, erish egri chizig'ining tahlilini tasdiqlash muhimdir, chunki bu to'g'ri tavlanish haroratini tanlash uchun yaxshi ko'rsatkichdir.
Primer dizayn dasturi dizaynga yordam beradi, to'g'ri tavlanish haroratini ta'minlaydi va PCR plitalaridagi xatolarni to'g'ridan-to'g'ri kamaytiradi.
pcr plitasi
