Ko'pincha hujayra madaniyati jarayonida u yoki bu turdagi muammolar mavjud. Hujayra madaniyatini kamsitmang, lekin unda universitet savollari mavjud. Foydalanuvchilar bilan muloqot qilish orqali siz oldini olish mumkin bo'lgan ko'plab muammolarni topasiz. Hujayra kulturasi jarayonida quyidagilar keng tarqalgan. Anormallik sababini tahlil qiling.
petri idishi
1. Madaniy hujayralar devorga yopishmaydi
mumkin bo'lgan sabab
1. Tripsinni ortiqcha hazm qilish;
2. Mikoplazma bilan ifloslanish;
3. Muhitning pH qiymati juda ishqoriy (NaHCO3 parchalanishi);
4. Hujayralarning qarishi;
5. Emlangan hujayralarning dastlabki konsentratsiyasi juda past yoki juda yuqori.
Yechim
1. Tripsin hazm qilish vaqtini qisqartirish yoki tripsin kontsentratsiyasini kamaytirish;
2. Madaniyatni ajratib oling va mikoplazmani aniqlang. Stendni yoki inkubatorni tozalang. Agar mikoplazmaning ifloslanishi aniqlansa, madaniyatni tashlang;
3. pH ni sozlash yoki steril CO2 bilan to'ldirish uchun steril sirka kislota eritmasidan foydalaning;
4. Yangi konservatsiya hujayralarini yoqish;
5. Optimal emlangan hujayra konsentratsiyasini sozlang.
2. Suspenziya hujayralarining klasterlanishi
mumkin bo'lgan sabab
1. Madaniy muhitda kaltsiy va magniy ionlari mavjud;
2. Mikoplazma bilan ifloslanish;
3. Proteaza bilan ortiqcha hazm qilish hujayra lizisini keltirib chiqaradi;
4. DNKning ifloslanishi.
Yechim
1. Hujayralarni kaltsiy va magniysiz muvozanatli tuz eritmasi bilan yuving va muloyimlik bilan puflang va so'ring.
2. Hujayralar bitta hujayra suspenziyasini oladi;
3. Madaniyatni ajratib oling va mikoplazmani aniqlang;
4. Hujayralarni DNasel bilan davolash.
3. Madaniy hujayralar sekin o'sadi
mumkin bo'lgan sabab
1. Turli madaniyat muhiti yoki sarumni almashtirish tufayli;
2. Madaniyat muhitida hujayra o'sishi uchun zarur bo'lgan ba'zi komponentlar, masalan, glutamin yoki o'sish omillari kamaygan yoki etishmayotgan yoki yo'q qilingan;
3. Madaniyatda oz miqdorda bakterial yoki qo'ziqorin bilan ifloslanish mavjud;
4. Reaktivlarni noto'g'ri saqlash;
5. Emlangan hujayralarning dastlabki konsentratsiyasi juda past;
6. Hujayralar qarigan;
7. Mikoplazma bilan ifloslanish.
Yechim
1. Yangi muhit va asl muhitning tarkibini solishtiring, hujayra o'sishi tajribalarini qo'llab-quvvatlash uchun yangi sarum va eski sarumni solishtiring va hujayralar asta-sekin yangi muhitga moslashsin;
2. Yangi tayyorlangan madaniyat muhitiga o'zgartiring yoki glutamin va o'sish omillarini qo'shing;
3. Madaniyat uchun antibiotiksiz madaniyat muhitidan foydalaning, agar ifloslanganligi aniqlansa, madaniyatni tashlang;
4. Sarum -10 dan -20 darajagacha saqlanishi kerak. Madaniyat muhiti qorong'i joyda 2-8 darajada saqlanishi kerak. Sarum o'z ichiga olgan to'liq madaniyat muhiti 2-8 darajada saqlanishi va 1 hafta ichida ishlatilishi kerak;
5. Emlangan hujayralarning dastlabki konsentratsiyasini oshirish;
6. Yangi saqlash katagiga o'zgartirish;
7. Madaniyatni ajratib oling va mikoplazmani aniqlang. Stend va inkubatorni tozalang. Agar mikoplazma bilan ifloslanish aniqlansa, madaniyatni tashlang.
To'rtinchidan, madaniy hujayralar yomon o'sadi
mumkin bo'lgan sabab
A. Hujayraning o'zi holati
1. Hujayra o'tishlari soni ko'p, hujayralar qariydi;
2. Hujayra emlash miqdori: juda kam emlash miqdori, hujayra o'sishi sekin;
3. Hujayralarning o'tishi juda kech: hujayralar zaharlanishi, o'tishdan keyin hujayralar o'sishiga ta'sir qiladi;
4. Tripsin hazm qilish vaqti juda uzun yoki juda qisqa: vaqt juda uzoq bo'lsa, hujayralar o'ladi; vaqt juda qisqa bo'lsa, hujayralar to'liq klasterlarga ajratilmaydi va hujayralar o'ladi;
5. Hujayralarni kriyokonservalash va tiklash: sekin muzlash va lahzali lizis.
B. Ifloslanish
1. Mikoplazma bilan ifloslanish;
2. Qolib ifloslanishi.
C, madaniy muhit yoki sarum
1. Sarum yoki vositani almashtirishdan oldin tekshirish yo'q;
2. Tanlangan vosita mos keladimi;
3. O'rta tayyorgarlik mos keladimi;
4. O'rta tayyorgarlikning aniqligi.
D. muhitni tarbiyalash
1. CO2 ta'minoti normalmi?
2. Inkubator yoki shakerning harorati to'g'ri nazorat qilinadi.
Yechim
Yuqoridagi to'rtta mumkin bo'lgan sababga ko'ra, maqsadli echimlarni ishlab chiqing
1. Hujayralarning holatiga e'tibor bering: masalan, o'tishlar soni, emlash miqdori va boshqalar;
2. Ifloslanishdan saqlaning (muntazam, qonuniy va izlanadigan sarumdan foydalaning);
3. Tegishli sarum yoki vositadan foydalaning, yaxshisi tasdiqlangan;
4. Laboratoriya muhitiga e'tibor bering.
Madaniyatda hujayra o'limining mumkin bo'lgan sabablari
1. Inkubatorda CO2 yo'q;
2. Inkubatordagi harorat juda ko'p o'zgarib turadi;
3. Hujayralar kriyokonservalash yoki qayta tiklash vaqtida shikastlanadi;
4. Madaniy muhitning osmotik bosimi noto'g'ri;
5. Madaniy muhitda zaharli metabolitlarning to'planishi.
Yechim
1. Inkubatorda CO2 ni aniqlash;
2. Inkubatordagi haroratni tekshiring;
3. Yangi saqlanib qolgan hujayra turini oling;
4. Madaniy muhitning osmotik bosimini aniqlash;
5. Yangi madaniy muhitga o'tish;
