Hammamizga ma'lumki, laboratoriyada o'stirilgan hujayralar turlarini taxminan ikki turga bo'lish mumkin: yopishgan hujayralar va suspenziya hujayralari va ikkala holatda ham bir nechta hujayralar mavjud.
Suspension hujayralar limfotsitlar va ko'pchilik qon tizimidan kelib chiqadigan hujayralar kabi tayanchlarga tayanmasdan muhitda to'xtatilgan holatda o'sishi mumkin bo'lgan hujayralar turiga ishora qiladi. (masalan, sichqon leykemiya hujayralari WEHI-3, inson leykemiya hujayralari K-562, HL-60). Sanoatda tobora ko'proq yopishgan hujayralar xonakilashtirildi va to'liq suspenziyada o'stirildi. Hozirgi vaqtda SP2/0, NS0, CHO, BHK va HEK293 hujayralari asosan sanoatda qo'llaniladi va ular asosan rekombinant oqsil ishlab chiqarish uchun ishlatiladi; veterinariya biologik mahsulotlarida keng qo'llaniladigan o'tish hujayralari asosan to'liq suspenziyada o'stirilgan BHK21 hujayralarini, MDCK hujayralarini o'z ichiga oladi; va Vero hujayralari, PK hujayralari, ST xujayralari, Marc145 xujayralari va boshqalar mikrotashuvchi suspenziya kulturasi yordamida har bir hujayra turli xil xususiyatlarga ega.
Suspension hujayralar
Suspension hujayralar "thp-1" 200x
Umuman olganda, suspenziya xujayralari yopishgan hujayralarga qaraganda osonroq ishlaydi, chunki suspenziya hujayralarining o'tishi uchun tripsinizatsiya talab qilinmaydi. Ammo bu suspenziya hujayralari yopishgan hujayralarga qaraganda osonroq o'sishini anglatmaydi. Yangi boshlanuvchilar uchun bu qiyinroq. Har doim turli xil muammolar mavjud: masalan, nima uchun o'lik hujayralar va hujayralar differentsiatsiyasi doimo paydo bo'ladi; o'tish oson ekanligiga kelishilgan, ammo natijada farqlash bo'ladi; Kriyokonservalash va tiklanishdan keyin muammolar yana paydo bo'ladi!
Keyinchalik, suspenziya hujayralarini etishtirish bo'yicha ba'zi asosiy fikrlarni muhokama qilaylik ~
1-band: Etarli sabr, bu juda zarur
Ko'pgina suspenziya xujayralari faqat kriokonservatsiyadan tiklanganda nisbatan yomon hayotiylikka ega. Bu vaqtda hujayralar o'z-o'zini tiklashni yakunlashini va logarifmik o'sish bosqichiga kirishini kutish uchun etarlicha sabr-toqatli bo'lishimiz kerak. Masalan, THP-1 (odamning monotsitar leykemiyasi) ko'pincha eritishdan normal ko'payishgacha 7-10 kun tiklanish davrini talab qiladi; Jurkat, Klon E6-1 (inson T-limfotsitar leykemiya hujayralari) ham tiklanishdan keyin 5-7 kun talab qiladi. Muzlatishdan oldin holatga qayting. Yangi boshlanuvchilar bu davrda mashg'ulotlardan voz kechishi mumkin, shuning uchun sabrliroq bo'ling! Bunday hujayralarni yetishtirish ham sabrni tarbiyalash jarayonidir!
2-nuqta: emlash zichligini ushlang
Umuman olganda, suspenziya hujayralarining zichligi 500,000/ML dan kam bo'lmasligi kerak. Ko'pgina suspenziya hujayralari zichlikka bog'liq va past zichlikdan kelib chiqadigan tarqalmaslik ham yangi boshlanuvchilar uchun keng tarqalgan muammolardan biridir. Albatta, W6/32 (sichqonchaning B xujayrasi gibridoma hujayralari) kabi zichlik yuqori bo'lganda holati yomonlashadigan hujayralar juda kam. Shuning uchun noma'lum hujayralarni etishtirishdan oldin hujayralarning xususiyatlarini tushunish uchun tegishli ma'lumotlarni izlash juda muhimdir. Faqat o'zingizni va dushmanni bilish orqali siz barcha janglarda g'alaba qozonishingiz mumkin!
O'rta almashtirish chastotasi "aniq" bilan cheklanmasligi kerak. Hujayralar tirik mavjudotlardir. Uzluksiz kultura tsikli davomida hujayralarning yaxshi o'sish holatini saqlab turish uchun hujayralarning o'sish holatiga qarab qo'shimcha vosita va glyukoza kabi o'ziga xos oziq moddalar bir necha marta qo'shilishi mumkin. . Suspenziya madaniyati jarayonida hujayralarning ko'payishi, asl muhitda ozuqa moddalarini iste'mol qilish va metabolitlarning ko'payishi bilan hujayralarning hayotiyligi pasayadi va ozuqa moddalarining o'z vaqtida qo'shilishi hujayralarni nisbatan yaxshi yashash muhitiga aylantiradi. Men bu erda tafsilotlarga kirmayman va tez-tez santrifüjlash va suyuqlikni almashtirishdan qoching.
Keling, suyuqlikni almashtirish usuli haqida gapiraylik:
①Santrifüjli to'liq suyuqlik almashinuvi usuli
Ya'ni, barcha eski muhitni santrifüjlash orqali olib tashlang (800-1000rpm, 5 min) va yangi muhit bilan almashtiring. Ushbu usul "teri qattiq" yaxshi ko'tarilgan suspenziya hujayralarini (masalan, K562) o'rtacha almashtirish uchun javob beradi yoki hujayralar yaxshi holatda va zichligi yuqori bo'lgan hozirgi vaziyatda, natijada vosita katta iste'mol qilinadi. Ushbu usulning afzalligi shundaki, muhit yaxshilab o'zgartiriladi va ba'zi hujayra qoldiqlari olib tashlanishi mumkin, ammo u hujayralarga ma'lum darajada mexanik shikast etkazadi.
②Santrifüj yarim almashinuv usuli
Ya'ni, 50% hujayra suspenziyasini (800-1000rpm, 5 min) santrifüjlash orqali yangi muhitning 50% hajmini almashtiring. Bu usul "ikkiyuzlamachi" yetishtirish qiyin bo'lgan hujayralarni (masalan, thp-1) yoki zichligi past bo'lgan, lekin sozlash holatida ko'proq qoldiqlarni olib tashlash kerak bo'lgan vaziyatni solishtirish uchun javob beradi.
③Sedimentatsion suyuqlik almashinuvi usuli
Ya'ni, sentrifugani ishlatish o'rniga, yangi muhitni butunlay yoki bir qismini almashtirish uchun muhitni hujayralardan ajratish uchun tortishish bilan tabiiy cho'ktirish usuli qo'llaniladi. Biroq, u qo'llash cheklovlariga ega - u faqat ma'lum o'lchamdagi hujayra klasterlarini hosil qila oladigan hujayralar uchun javob beradi (aks holda ular tabiiy ravishda joylasha olmaydi va faqat past tezlikda santrifüj qilinishi mumkin), ayniqsa hujayralar to'planishiga tayanadigan hujayralar bilan ishlashda. , masalan, NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Ushbu usul suyuqlik almashinuvi jarayonida santrifüjlash jarayonidan kelib chiqadigan mexanik shikastlanishni minimallashtirishi mumkin, shu bilan birga yig'ilgan hujayra massasini saqlab qoladi va hujayra qoldiqlarini olib tashlash nisbatan chuqurroqdir.
Yuqoridagi fikrlarni, shuningdek, yaxshi hujayra urug'ini o'zlashtirgandan so'ng, "chiroyli" suspenziya hujayralarini etishtirish uchun burchakda!
hujayra madaniyati plastinkasi
Yongyue Medicalning U shaklidagi hujayra madaniyati plitasi asosan 100 darajali tozalash ustaxonasida ishlab chiqarilgan, nurlanish bilan sterillangan, DNase, RNase va pirojensiz tibbiy polistirol (PS) yordamida suspenziya hujayralarini etishtirish uchun ishlatiladi. -bepul , Xavfsizlik va atrof-muhit muhofazasi.
Hujayra madaniyati plitalari turli xil bakterial madaniyatlarning ehtiyojlarini qondirish uchun turli xil xususiyatlarga ega. Mahsulot turlari 6-yaxshi, 12-yaxshi, 24-yaxshi, 48-yaxshi, 96-yaxshi va 384-yaxshi, qaysi 96-quduq tekis-pastki, U-pastki, V-pastki tubiga boʻlinadi; U shaklidagi madaniyat plitalari asosan suspenziya hujayralarini etishtirish uchun ishlatiladi; V shaklidagi kultura plitalari asosan immunologik gemagglyutinatsiya tajribalari uchun ishlatiladi.
